HPLC指南

一、HPLC是什么？

HPLC（High Performance Liquid Chromatography，高效液相色谱） 是一种分离和定量分析混合物的技术。核心思想很简单:

把混合样品溶解在液体里，让它在高压下流过一根填充了特殊材料的细管子（色谱柱）。样品中不同成分因为和填料"亲和力"不同，跑出来的速度也不同，于是被分开。出柱后用检测器逐一测量信号，画成图（色谱图）。

溶剂瓶 → 泵 → 进样器 → 色谱柱 → 检测器 → 数据工作站 → 废液瓶

一台60w，得小心操作

流动相（mobile phase）：流动的液体，带着样品走。比例和pH直接影响分离效果。

固定相（stationary phase）：色谱柱里的填料，不动。最常见的是C18柱（反相柱）——表面接了十八烷基（疏水链）。

反相色谱（RP-HPLC）：规则是"极性强的先出，极性弱的后出"。流动相极性比固定相强，疏水化合物在C18上停留时间长。

保留时间（Retention Time, tR）：化合物从进样到出峰的时间。是定性的依据——同一条件下，标准品和样品如果保留时间一样，就推测是同一种物质。

峰面积：色谱图上峰下方的面积。与浓度成正比，是定量的依据。

内标法：原理是：每个样品都加入等量的内标物，用"待测物峰面积 / 内标峰面积"这个比值来定量。这样即使进样体积有点偏差、样品前处理有损失，比值也稳定，结果更准。